Pitseerimis- ja saastumisprobleemid multiwelli rakukultuuri taldrikutes

Multi-auguga rakukultuuriplaatide laadimine ja käitlemine:

Rakukultuuriplaat järgib rakuoperatsioonide tegemisel ka range ASEPSISi põhimõtet. Kõik toimingud peavad olema standardiseeritud ja teaduslikud ning ei mõjuta rakkude kasvule täiendavat mõju. Kõige tavalisem probleem on see, kuidas tagada rakkude ühtlus pärast proovi lisamist ja minimeerida söötme muutmise mõju rakkude kasvu olekule.

küsige:
96 ja 24-auguliste kultuurplaatide või Petri roogade kaaned on väga lahti, mis on ventilatsiooni jaoks mugav, kuid kas ka bakterid, hallitus ja muud saasteained libisevad?

Vastus:
Kaane on väga lahti, mis kuulub pooleldi avatud kultuuri, ja selle eesmärk on ventileerida (tegelikult on see muuta CO2 väljaspool kultuuriroogi täielikult kultuuriroogaga ja säilitada kultuuri pH väärtus keskmine).
Kõigil on plussid ja puudused, mis muidugi suurendab reostuse võimalust. Lisaks põhjustab see roogi vedeliku aurustumise, mis on märkimisväärne ravimite täpse annustamise korral. Seetõttu on vaja kahte järgmist meedet: a. Inkubaatori õhk peab olema puhas (tavaline ultraviolettvalgus, alkoholipuhastus ja inkubaator tuleb avada ja võimalikult vähe sulgeda) b. Inkubaatori õhuniiskust tuleb alati hoida 100% (inkubaatorisse asetatud steriilse destilleeritud veega kraanikauss).
Nii nagu Petri roog, on see ka tagurpidi kaanega konteiner ja see ei saa saasta. Peamiselt seetõttu, et katte "L" serva tekitatud õhuvoolu negatiivse rõhu tõttu on tolmu külge kinnitatud mikroorganismid ja õhuvoolu kantav tolm ei saa katte servast läbi, mis tekitab negatiivset rõhku. Ventilatsiooni efekt toimub ainult õhu difusiooni kaudu ja õhuvoolu ei tekitata, nii et see ainult hingab, mitte tungib bakteritesse.

küsige:
Kasutades 24-süvendilist plaati, on mõnes kaeves toimingud (ülipuhta pingil) ja seal on rakke, mida tuleb kultiveerida teistes kaevudes. Olen mures, et see põhjustab saastumist. Ma ei tea, millele tähelepanu pöörata?

Vastus:
Kui toiming on ülitugevas pingis standardiseeritud, peaks see olema korras. Arvan, et saate täielikult kasutada kultuuriplaadi kaant, proovida paljastada ainult käitatavaid auke ja katta muud augud kaantega.
Enne kasutamist kaaluge põhjalikult ja kasutage kõiki auke täielikult; Kui peate kasutama ainult mõnda auku, saate kasutada ainult ühte külge ja katta ülejäänud kattega. Olen harjunud kõigepealt kasutama paremat auku (parem on lisada proovid paremale käele).

Töötades kasutage tahvli ühe külje tõstmiseks paar klaasist slaidi, ärge avage katte täielikult, üldiselt pole probleemi.
Rakkude ebaühtlane jaotus ja lahendused

küsige:
Rakud inokuleeritakse kultuuriplaadile ja rakud kogunevad alati perifeersesse ossa, kuidas sellega toime tulla?

Vastus:
Kas tohib küsida, kuidas teie rakud segatakse? Kas see on kultuuriplaadi pipeteerimine või raputamine? Kui see on viimane ja kui seda ringi raputatakse, siis on väga tõenäoline, et rakud visatakse tsentrifugaaljõu tõttu perifeersesse osa, mille tulemuseks on vähem rakke keskel. Rohkem kui neli nädalat!
Siin on hea viis: enne seemneplaadi viljelemist pange kultuuriplaat inkubaatorisse mõneks tunniks küllastumiseks ja siis võtke see välja. Jõud peaks rakkude istutamisel olema kerge. Aeglaselt lisamine võimaldab raku suspensioonil voolata plaadi süvenditesse ja kultiveeritud rakud kasvavad põhimõtteliselt ühtlaselt. Ärge unustage kunagi raputajaga raputada, vastasel juhul koputavad teie rakud kokku nagu ütlesite.
Mida väiksem on kultuuriplaadi augu läbimõõt, seda ilmsem see nähtus on. See nähtus on 24 ja 96-süvendilise plaadi jaoks vältimatu, kuna vedelik kleepub seina külge, nii et kaevu kultuurilahus ei moodusta vedelat, kuid perifeeria on kõrge, täpselt nagu nõgus peegel. Nende kahte tüüpi avaplaatide kasutamisel ei ole täiendava sekkumise vajaduse tõttu võimalik lisada piisavalt palju kultuurilahust, nii et rakud ilmuvad koos kultuurilahendusega servade kogumise. See sõltub sellest, milliseid näitajaid peate jälgima. Kui see on MTT, mõjutab immunohistokeemia rakkude kihistamisest tulenevaid tulemusi.
Rakkude seedimisel pöörake rakukrumbide vältimiseks tähelepanu ühtlaselt pipeteerimisele ja kaevu kultuurilahuse hulk peaks olema piisav. Üldiselt lisage inokuleerimisel piisavalt kultuurilahendust ja muutke sekkumise lisamisel lahendust üks kord. Sekkumislahendusele lisatud kultuurilahenduse hulk võrdub inokuleerimise ajal kultuurilahenduse hulgaga, antud juhul paraneb "servakomplekti" nähtust, nii et võiksite seda proovida.

küsige:
See, mida ma tegin, oli naastude moodustumise eksperiment. Parim on levitada rakke ühtlases kihis. Enamik auke on viiruse inokuleerimisel korras ja mõned neist pole ühtsed. Rakugrupis on suuri erinevusi. Tahaksin teilt küsida, millist meetodit lahtrite lisamisel kasutate?

Vastus:
Pärast seedimist on kriitilise tähtsusega rakud üherakulisteks suspensiooniks! Veenduge, et iga süvendi rakkude arv oleks plaadi lõhestamisel ühtlane!
Muidugi on ka töötlemistegureid. Ka kaevude vaheline paralleelsus on samuti väga oluline. Näiteks segage ravimi lisamisel ravimit pärast lahjendamist, et tagada iga süvendi kontsentratsioon ühtlane!
Lisaks tuleks rakkude ja ravimite lisamisel omakorda lisada katserühm ja kontrollrühm, et vältida proovide lisamise järjestuse põhjustatud rakkude tiheduse ja ravimi kontsentratsiooni erinevust!

küsige:
Puhumine on juba ühtlane, kuid planeerimine, 6 auku ja 24 auku on alati mõnevõrra ebaühtlane ja keskendunud pisut. Pealegi on ilmne, et loendamine on tehtud, ja päeva või kahe pärast on iga augu tihedus erinev, mis mõjutab tuvastamist. Kas on hea viis?

Vastus:
Kui kasutate pastuurpipetti, ärge imege iga kord liiga palju, sest pipeti rakud vajuvad automaatselt, sageli on rakkude arv esimeses augus suur ja raku suspensioon on sageli ühtlane ja vedelik saab Järgige S-kujulist marsruuti.
Kui kasutate pipeti, tuleks näpunäiteid rakkude kahjustamise vältimiseks töödelda ja eemaldada, nii et iga kord, kui vedelik võetakse, vastab kaevu. Täpsem on lisada otsaga üks-ühele auk. Kuid pöörake tähelepanu ka peatamise segamisele.

Paralleelrühma seadistamiseks peab N olema piisavalt suur (saate selle arvutada).

Ärge raputage pärast plaadistamist, kuna raputamine põhjustab rakkude agregeerumist keskpunkti poole. Kõige parem on korra plaadiks.

Poorse rakukultuuri plaat Yongyue Medical on alati pidanud kvaliteedikontrolli ettevõtte elueaks ja jätkanud ettevõtte konkurentsivõimet pidevat täiustamist. Ettevõte järgib alati seaduste ja määruste järgimise ettevõtlusvaimu, olles range enesedistsipliiniga, olles leebe ja julgeb võtta vastutust kui standardset töötavat, säilitada ja laiendada turu suurepärase kvaliteedi ja suurepärase teenindusega ning kohtudes Klientide vajadused kõige suuremal määral. . Klientidega võidakse meie arengueesmärk. Yongyue meditsiin! Teie usaldusväärne partner. Oleme nõus teiega parema tuleviku loomiseks siiralt koostööd tegema.