PCR -katsetes reaktiivi lendumise üksikasjalik selgitus

PCR -katsetes reaktiivi lendumise üksikasjalik selgitus.

PCR -eksperimendis katame pärast reaktsioonisüsteemi lisamist kaane ettevaatlikult ja kinnitame korduvalt, et kaane on suletud, et vältida reagendi lendumist. Kuid mõnikord on meil ka kahtlusi: oleme kinnitanud, et kaas on tihedalt suletud, kuid pärast eksperimendi lõppu aurustub reagent endiselt. Mis on põhjus?

Tegelikult on reaktiivide lendumine PCR -katsetes üks levinumaid probleeme ja on palju tegureid, mis mõjutavad reaktiivi lendumist.

Aurustamine viitab PCR -eksperimendi ajal, reaktsioonilahus aurustub kõrgel temperatuuril ja kondenseerub seejärel pudeli seina või ülemise kattega, moodustades vee -udu või veepiisad või voolab otse pudeli korgi või kile õhupiletist, mis tuleneb sellest, mis tuleneb reaktsioonilahuse kontsentratsiooni muutumisel. Muutused, reaktsioonilahuse kogus vähenes ja mõned aurustusid isegi kuivaks, põhjustades kehtetud katsed.

1. Kuum kaane rõhk, temperatuur

PCR -katsetes soojendame tavaliselt kaane, et vältida reagentide auru kondenseerumist. Kuumutatud kaane temperatuur on tavaliselt kõrgem kui reaktsioonilahuse temperatuur, et vältida aurude kondenseerumist.

Toodetsükli kuumutamiskaane saab laias laastus jagada järgmisteks neljaks tüübiks: mitte reguleeritavad küttekaaned, reguleeritavad küttekaaned, adaptiivsed küttekaaned ja automaatsed küttekaaned. Reguleeritav kuumutatud kaanel on sõrmekindla tihendus. Kui seda ei pingutata, aurustuvad reagendid. Serva aurustumist saab minimeerida, suurendades kuumutatud kaane rõhku. Mõnikord võib ülekoormamine toru näpistada ja nuppu keerata. Tavaoludes saab elektriline nutikas küttekate automaatselt tuvastada erineva kõrgusega tarbekaupade, suruda tarbekaupade automaatselt ning rõhk on ühtlane ja püsiv, vähendades seeläbi reagentide aurustumist ja käsitsi vigu ning parandades eksperimentaalset täpsust ja korratavust.

2. Tarbekaupade deformatsioon

Aurulekke jaoks arvab enamik inimesi, et kuuma kaane rõhust ei piisa. Kuuma kaane rõhk on väga oluline, kuid see on ainult üks aspekt. Tegelikult on tarbekaubid ka väga olulised.

PCR -avaplaadid on tavaliselt valmistatud plastmaterjalidest, mis pärast kuumutamist suuresti laienevad ja deformeeruvad. PCR -metalli aluse soojuspaisumiskiirus, mida kasutati PCR -avaplaadi asetamiseks, on äärmiselt madal ja PCR -dikiplaat ei saa pärast soojuspaisumist tavaliselt tasapinnale laieneda. Puuleseisund paneb ülemise kuumusekatte PCR -avaplaadi pinnaga täielikult ühendust võtma, põhjustades ebaühtlase temperatuuri ja rõhku, põhjustades reaktiivi aurustumist PCR -avaplaadi servas ja mõjutades PCR -i tuvastamise efekti.

3. Tarvisettevõtted ei ole tihedalt suletud

Termilise kaane ja tarbekaupade tihedus ei tähenda, et PCR -toru kork oleks tihedalt suletud ja PCR kaevu plaadi kvaliteet on ebaühtlane. Kvaliteetsed tarbekaubad, düüsi pind ja kate on siledad ning kasti katte taga olev tihend on hea ning seda pole lihtne lekkida. Madalamatel tarbekaupadel on ebaühtlased tilad ja radiaalsed jooned, mis võivad hõlpsalt põhjustada lekkeid või isegi kuivada.

Seetõttu proovige PCR-katsetes valida kvaliteetsed ja sobivad tarbekaupa. Samal ajal saab reaktsioonisüsteemi laiendada, et minimeerida süsteemi aurustumise mõju reaktsioonile.